B27無血清培養(yǎng)基在使用無血清培養(yǎng)基時，有些細胞需要逐漸適應(yīng)，即先將原來的培養(yǎng)基與無血清培養(yǎng)基混合培養(yǎng)，漸漸地再轉(zhuǎn)為*的無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)。有些貼壁生長的細胞，復(fù)蘇時也可用少量的血清先培養(yǎng)，因為血清可助細胞貼壁，然后再換成無血清培養(yǎng)基。
B27無血清培養(yǎng)基的主要補充因子
補充因子是代替血清的各種因子的總稱。多數(shù)無血清培養(yǎng)液必須補加3-8種因子。胰島素、亞硒酸鈉和轉(zhuǎn)鐵蛋白是必須補充因子，其他多數(shù)為輔助作用的因子。按其功能不同，補充因子可分為五類：
激素和生長因子。很多細胞用無血清培養(yǎng)時需要加入激素，如胰島素、生長激素、胰高糖素等。胰島素是重要的細胞存活因子，與細胞上的胰島素受體結(jié)合后可促進RNA、蛋白質(zhì)和脂肪酸的合成，抑制細胞凋亡。此外，雌二醇、孕酮、氫化可的松等也是無血清培養(yǎng)基中常添加的補充因子。
結(jié)合蛋白。常見如轉(zhuǎn)鐵蛋白和牛血清白蛋白。轉(zhuǎn)鐵蛋白與細胞上的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體結(jié)合是細胞獲取鐵元素的主要來源。白蛋白與脂類、激素、維生素、金屬離子和生長因子結(jié)合后可調(diào)節(jié)上述物質(zhì)在B27無血清培養(yǎng)基中活性的作用，此外，由于牛血清白蛋白一般添加量比較大，可增加培養(yǎng)基的粘度，保護細胞免受機械損傷。
貼壁因子。許多細胞必須貼壁才能生長，這種情況下B27無血清培養(yǎng)基中一定要添加促貼壁和擴展因子，一般為細胞外基質(zhì)，如纖粘連蛋白、膠原蛋白等。它們還是重要的分裂素以及維持正常細胞功能的分化因子，對許多細胞的繁殖和分化，起著重要作用。纖粘連蛋白主要促進來自中胚層細胞的貼壁與分化，這些細胞包括成纖維細胞、肉瘤細胞、粒細胞、腎上皮細胞、腎上腺皮質(zhì)細胞、CHO細胞、成肌細胞、CHO細胞等。
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