Sigma蛋白酶K是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶,用于生物樣品中蛋白質的一般降解。從林伯氏白色念球菌中純化得到。蛋白酶K是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵。此酶經純化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中穩定,還具有降解天然蛋白質的能力。
Sigma蛋白酶K是怎樣應用在分子生物學中的
線粒體分離
核酸純化產物的蛋白質消解。在分子生物學應用中,蛋白酶K常用于消解無用的蛋白質,例如從微生物、培養細胞和植物的DNA或RNA制劑中消解核酸酶。在核酸制劑之中,這種酶的使用濃度通常為50-200µg/ml,pH7.5-8.0,37°C。孵育時間30分鐘至18小時不等。盡管在長期孵育時,蛋白酶K可以自動消解,但通常還是通過后續的本分萃取法使其變性。
蛋白酶K已經用于去除陽離子蛋白質上結合的內毒素,如溶菌酶和核糖核酸酶A上的內毒素。
確定酶在膜上的分布
處理石蠟包埋的組織,以便暴露抗原結合位點進行抗體標記。
去除核酸酶進行原位雜交
傳染性海綿狀腦病(TSE)朊病毒研究及草擬的診斷測試方法利用蛋白酶K消解來自大腦組織樣本的蛋白質。
采用蛋白酶K消解法進行蛋白酶足跡實驗,去除蛋白質-蛋白質表面互作。